Alat Rapid Antigen: ความรู้พื้นฐานเกี่ยวกับการตรวจจับกรดนิวคลีอิก - ตอนที่ 1

แอนติเจน: ความรู้พื้นฐานเกี่ยวกับการตรวจจับกรดนิวคลีอิก

1. การตรวจจับกรดนิวคลีอิกคืออะไร

คำจำกัดความของกรดนิวคลีอิก: กรดนิวคลีอิกเป็นชนิดของ macromoleculeculeculecules ชีวภาพที่เชื่อมต่อกันโดยนิวคลีโอไทด์หรือ Deoxynucleotides ผ่าน 3 ', 5' - พันธบัตรฟอสเฟต Diester

กรดนิวคลีอิกมีฟังก์ชั่นทางชีวภาพที่สำคัญมากการจัดเก็บและส่งข้อมูลทางพันธุกรรมเป็นหลัก

2. การจำแนกประเภทของกรดนิวคลีอิก

Macromolecules กรดนิวคลีอิกสามารถแบ่งออกเป็นสองประเภท: กรด Deoxyribonucleic (DNA) และกรด Ribonucleic (RNA)

3. องค์ประกอบของกรดนิวเคลียส

DNA และ RNA นั้นเกิดขึ้นจากการเชื่อมต่อศีรษะและหางของนิวคลีโอไทด์ซึ่งประกอบด้วยห้าองค์ประกอบ: C, H, O, N และ P.DNA เป็นวัสดุพันธุกรรมของสิ่งมีชีวิตส่วนใหญ่ RNA เป็นวัสดุทางพันธุกรรมของไวรัสฟรี DNA สองสามตัวเช่นเอชไอวีไข้หวัดใหญ่ไวรัสโรคซาร์ส ฯลฯ ความยาวเฉลี่ยของ RNA เป็นประมาณ 2,000 นิวคลีโอไทด์ในขณะที่ DNA ของมนุษย์มีความยาวมากประมาณ 3x10 ^ 9 นิวคลีโอไทด์

4. ฟังก์ชั่นของกรดนิวคลีอิก

มันมีบทบาทในการจัดเก็บและส่งข้อมูลทางพันธุกรรมในการจำลองแบบโปรตีนและการสังเคราะห์กรดนิวเคลียร์ไม่เพียง แต่เป็นวัสดุพันธุกรรมพื้นฐาน แต่ยังมีบทบาทสำคัญในการสังเคราะห์โปรตีน ดังนั้นจึงมีบทบาทชี้ขาดในชุดของปรากฏการณ์ชีวิตที่สำคัญเช่นการเจริญเติบโตพันธุกรรมและการเปลี่ยนแปลง

DNA และ RNA เป็นกรดนิวคลีอิก อะไรคือความแตกต่างในองค์ประกอบทางเคมีของพวกเขาดังต่อไปนี้:

5. วิธีการทดสอบ

วิธีการตรวจจับกรดนิวคลีอิกส่วนใหญ่ตรวจจับกรดนิวคลีอิกเป้าหมายในตัวอย่างโดยการขยายกรดนิวเคลียสเป้าหมายพร้อมกัน สาขาอื่น ๆ

ในปัจจุบันวิธีหลักที่ใช้มีดังนี้:

. ลำดับกรดนิวคลีอิกขึ้นอยู่กับการขยาย

NASBA เป็นเทคนิคใหม่สำหรับการขยายความร้อนของ RNA จาก RNA mediated โดย primers คู่หนึ่งซึ่งเป็นลำดับต่อเนื่องและสม่ำเสมอและเฉพาะของนิวคลีโอไทด์ในหลอดทดลองปฏิกิริยาถูกดำเนินการที่ 42 ℃และแม่แบบ RNA สามารถขยายได้ประมาณ 109 ครั้งใน 2 ชั่วโมงหลักการของ NASBA คือการสกัด RNA ของไวรัสเพิ่ม AMV Reverse Transcriptase, RNASE H, T7RNA Polymerase และ Primers สำหรับการขยายปฏิกิริยาทั้งหมดแบ่งออกเป็นเฟสที่ไม่ใช่วงจรและแบบ cyclic: ในขั้นตอนที่ไม่ใช่แบบวงกลม RNA กำลังสังเคราะห์ CDNA ภายใต้การดำเนินการของ AMV Reverse Transcriptase เพื่อสร้าง RNA: DNA Hybrid จากนั้น RNASH DEGNADES RNA, Primer II และ CDNA จะถูกสังเคราะห์ DNA ที่สองเสริม strand ภายใต้การกระทำของ reverse transcriptase.under การกระทำของ t7rna Polymerase DNA ที่ควั่นคู่สามารถเริ่มต้นได้ตามลำดับโปรโมเตอร์เพื่อถอดความ RNA RNA สามารถย้อนกลับการคัดลอกไปยัง DNA ภายใต้การกระทำของ Reverse Transcriptase ป้อนเฟสหมุนเวียนและขยายเทมเพลตจำนวนมาก

b. การขยายการถอดรหัสไกล่เกลี่ย

หลักการทางเทคนิคของ TMA นั้นเหมือนกับของ NASBA ความแตกต่างเล็กน้อยคือ TMA ใช้ MMLV Reverse Transcriptase และ T7RNA Polymerase MMLV Reverse Transcriptase มีทั้งกิจกรรม Transcriptase ย้อนกลับและกิจกรรม RNASE H ปฏิกิริยาถูกดำเนินการที่ 41.5 ℃และแม่แบบ RNA สามารถขยายได้ประมาณ 109 ครั้งใน 1 ชั่วโมง

ค. ligase ปฏิกิริยาลูกโซ่ตัวเร่งปฏิกิริยา (LCR)

LCR เป็นเทคโนโลยีการขยาย Probe ตามการเชื่อมต่อโครงข่ายของโพรบ Oligonucleotide ที่ขึ้นอยู่กับเป้าหมายของโมเลกุลเป้าหมาย มันเป็นเทคโนโลยีที่มีแนวโน้มในการขยายหลอดทดลองที่พัฒนาขึ้นหลังจาก PCR.its หลักการคือการผสมผสานสองส่วน Oligonucleotide โพรบ DNA ที่ควั่นเดียวกับลำดับเป้าหมาย เมื่อโพรบ DNA สองส่วนจางหายไปกับเทมเพลตที่ไม่มีการกลายพันธุ์ถ้าโพรบทั้งสองอยู่ติดกันและไม่มีช่วงเวลานิวคลีโอไทด์อยู่ตรงกลางพวกเขาสามารถเชื่อมต่อภายใต้การกระทำของ ligase และห่วงโซ่ใหม่หลังจากการเชื่อมต่อสามารถใช้เป็น เทมเพลตเพื่อเป็นแนวทางในการเชื่อมต่อในรอบต่อไปเพื่อผลิตโซ่ย่อยใหม่หากการกลายพันธุ์ฐานของนิวคลีโอไทด์เกิดขึ้นในส่วนการเชื่อมต่อปฏิกิริยาการเชื่อมต่อไม่สามารถเกิดขึ้นได้และปฏิกิริยาการขยายจะถูกยกเลิก

d. ปฏิกิริยาปฏิกิริยาลูกโซ่โพลิเมอร์ (PCR)

หลักการพื้นฐานของเทคโนโลยี PCR นั้นคล้ายกับกระบวนการจำลองแบบธรรมชาติของ DNA และความจำเพาะของมันขึ้นอยู่กับไพรเมอร์ Oligonucleotide เสริมที่ปลายทั้งสองของลำดับเป้าหมาย PCR ประกอบด้วยสามขั้นตอนการเกิดปฏิกิริยาพื้นฐาน:

①การทำลายของแม่แบบ DNA: หลังจาก DNA เทมเพลตมีความร้อนประมาณ 93 ℃เป็นเวลาหนึ่งเส้น DNA แม่แบบ DNA หรือ DNA เกลียวคู่ที่เกิดขึ้นจากการขยาย PCR จะถูกแยกออกเป็นเกลียวเดียวเพื่อให้สามารถรวมกัน ด้วยไพรเมอร์เตรียมความพร้อมสำหรับการทำปฏิกิริยารอบต่อไป

②การหลอม (refolding) ของแม่แบบ DNA และไพรเมอร์: หลังจากที่ DNA เทมเพลตถูกทำให้ร้อนและแตกเป็นเส้นเดียวอุณหภูมิลดลงประมาณ 55 ℃และไพรเมอร์ถูกจับคู่กับลำดับเสริมของเกลียวของแม่แบบเดี่ยว

③ส่วนขยายไพรเมอร์: ภายใต้การกระทำของ Taqdna Polymerase เทมเพลต DNA Primper Conjugate ใช้ DNTP เป็นวัตถุดิบปฏิกิริยาและลำดับเป้าหมายเป็นเทมเพลตที่จะสังเคราะห์ห่วงโซ่การจำลองแบบกึ่งเก็บถาวรใหม่เสริมในเทมเพลตเชน DNA ตามหลักการจับคู่ฐานและกึ่งเก็บรักษา การจำลองแบบ ทำซ้ำทั้งสามกระบวนการของการต่อเนื่องของการหลอมต่อการหลอมแบบวงจรเพื่อให้ได้มากขึ้น \"โซ่การจำลองแบบกึ่งเก็บรักษา \" และห่วงโซ่ใหม่นี้สามารถกลายเป็นเทมเพลตสำหรับรอบต่อไปมันใช้เวลา 2-4 นาทีและ 2-3 ชั่วโมงเพื่อขยายยีนเป้าหมาย ที่จะขยายหลายล้านครั้งเพื่อตรวจจับ HIV RNA เราต้องถอดความ RNA เข้ากับ CDNA ด้วยปฏิกิริยาการถอดความย้อนกลับจากนั้นการขยาย PCR กับ CDNA เป็นเทมเพลต ปฏิกิริยานี้เรียกว่า RT-PCR