Alat Rapid Antigen: ความรู้พื้นฐานเกี่ยวกับการตรวจจับกรดนิวคลีอิก - ตอนที่ 2

แอนติเจน: รู้การตรวจจับกรดนิวคลีอิก

เรียลไทม์การเรืองแสง PCR เชิงปริมาณ

เทคโนโลยี PCR เชิงปริมาณแบบเรียลไทม์หมายถึงวิธีการเพิ่มกลุ่มเรืองแสงในระบบปฏิกิริยา PCR โดยใช้สัญญาณฟลูออเรสเซนต์เพื่อตรวจสอบกระบวนการ PCR ทั้งหมดในเวลาจริงและในที่สุดเชิงปริมาณการวิเคราะห์เทมเพลตที่ไม่รู้จักผ่านเส้นโค้งมาตรฐาน

หลักการของเทคโนโลยีนี้คือการทำเครื่องหมายโพรบกับกลุ่มฟลูออเรสเซนต์ทำเครื่องหมายกลุ่มเรืองแสง R ที่ปลาย 5 'และทำเครื่องหมายกลุ่มดับ Qที่จุดสิ้นสุดของ 3 ' เมื่อไม่มีการขยาย PCR กลุ่มฟลูออเรสเซนต์จะดับและไม่ปล่อยเรืองแสงเนื่องจากระยะทางเชิงพื้นที่ที่ใกล้ชิดระหว่างกลุ่มฟลูออเรสเซนต์และกลุ่มดับ; เมื่อ PCR ถูกขยายไพรเมอร์และโพรบเฉพาะที่ติดป้ายฟลูออเรสเซนต์ถูกรวมเข้ากับเทมเพลต ในเวลาเดียวกัน. ตำแหน่งที่มีผลผูกพันระหว่างโพรบป้ายฟลูออเรสเซนต์และเทมเพลตตั้งอยู่ระหว่างไพรเมอร์ต้นน้ำและปลายน้ำ โพรบฟลูออเรสเซนต์ถูกไฮโดรไลซ์โดยใช้กิจกรรม exonuclease 5 '3' ของเอนไซม์ TAQ และกลุ่มฟลูออเรสเซนต์ถูกปล่อยออกมา เพราะมันถูกแยกออกจากกลุ่มดับในอวกาศมันปล่อยฟลูออเรสเซนต์เรืองแสงที่ปล่อยออกมาสามารถตรวจพบได้โดยโพรบเรืองแสงขยายและตรวจพบในเวลาเดียวกันเพื่อให้ตระหนักถึง \"เรียลไทม์ \" การตรวจจับเทคโนโลยีนี้ไม่ได้ ตระหนักถึงการก้าวกระโดดของ PCR จากกึ่งเชิงปริมาณกับเชิงปริมาณ แต่ยังมีลักษณะของความจำเพาะที่แข็งแกร่งระดับสูงของระบบอัตโนมัติและการแก้ปัญหามลพิษ PCR อย่างมีประสิทธิภาพเมื่อเทียบกับ PCR ทั่วไป

การตรวจจับ DNA Strand สาขา - BDNA

BDNA เป็นวิธีการตรวจจับเชิงปริมาณของ HIV ประเภท 1 RNA ใน Plasma.BDNA หมายถึงชิ้นส่วน DNA สังเคราะห์ที่มีโซ่ด้านข้าง แต่ละโซ่ด้านข้างสามารถติดป้ายได้ด้วยเครื่องหมายที่น่าตื่นเต้น RNA ของ HIV ได้รับการปล่อยตัวจากอนุภาคไวรัสโดยการหมุนเหวี่ยงจากนั้นจับเข้าไปใน Micropores ด้วยการสอบสวนการจับภาพ

ผูกเข้ากับอีกส่วนหนึ่งของ RNA ของไวรัสและยังเชื่อมโยงกับโพรบที่ขยายไว้ล่วงหน้าหลังจากนั้นไฮบริดพร้อมกับโพรบขยายการขยาย BDNA โพรบเป้าหมายสองชุดเป้าหมายสองชุดผูกกับภูมิภาคที่แตกต่างกันของยีน POL ของ Viral RNA.Hivrne Oligonucleotide คอมเพล็กซ์ เกิดขึ้นใน micropores สัญญาณเคมีสามารถขยายได้หลังจากการบ่มด้วยการฟักตัวด้วยสารตั้งต้นแบบเคมี chemiluminescence มันมีปริมาณโดยความเข้มที่ส่องสว่างซึ่งเป็นสัดส่วนกับเนื้อหาของ hivrna ในตัวอย่าง. bdna ไม่มีการปนเปื้อนข้ามของแอมพลินิกส์ซึ่งเป็นความก้าวหน้าที่ยอดเยี่ยม เมื่อเทียบกับ PCR.BDNA มีโพรบหลายสิบตัวครอบคลุมจีโนมทั้งหมดซึ่งสามารถตรวจจับตัวแปร HIV บางตัวได้อย่างง่ายดาย แต่ความไวไม่ไวต่อ PCR การปรับปรุงความไวของ BDNA เป็นปัญหาสำคัญ

ขั้นตอนการตรวจจับ

กระบวนการตรวจจับของเทคโนโลยีการตรวจจับคุณภาพของกรด HIV นิวเคลียสแบ่งออกเป็นการสกัดกรดนิวคลีอิกการสังเคราะห์การถอดความย้อนกลับของ CDNA ปฏิกิริยาการขยาย PCR การวิเคราะห์เชิงคุณภาพของผลิตภัณฑ์ขยายการตัดสินผลลัพธ์และรายงานความสำเร็จ